Трава фиалки трёхцветной часто применяется для лечения кожных заболеваний, таких как псориаз и фурункулёз, диатез и экземы, лишаи, дерматиты, угри, сыпь, акне и т.д. Также наружное применение этого растения, в виде полосканий, полезно при гингивите, зубной боли, пародонтозе и плохом запахе изо рта. Лечит фиалка и суставные болезни – подагру, артрит, ревматизм. Её используют при заболеваниях дыхательной системы, в том числе астмы, бронхита, воспаления лёгких, пневмонии, кашля, коклюша, катара дыхательных путей, а также простуды. Употребление этого растения рекомендуется при болезнях мочевого пузыря, цистите и нарушениях мочеиспускания, при аритмии и атеросклерозе, эпилепсии, нервном перевозбуждении, бессоннице и других нервных заболеваниях. Помимо декоративного применения, это растение используется в народной медицине. Оно обладает мочегонными, отхаркивающими и другими свойствами. Фиалку трёхцветную применяют при воспалении лёгких, пневмонии, катарах дыхательных путей, бронхитах и других заболеваниях, затрагивающих органы дыхания. Также с её помощью лечат цистит и нарушения мочеиспускания, эпилепсию и атеросклероз. Фиалка оказывается полезной при болезнях кожи и многих других недугах. Она входит в состав лекарственных сборов, прежде всего, грудных и мочегонных.Трава фиалки трёхцветной содержит аскорбиновую, урсоловую и салициловую кислоты, большое количество антоциановых гликозидов, каротиноиды, эфирное масло, а также рутин, сапонины, алкалоиды, дубильные вещества, белки, калий, кальций, магний, железо и другие микроэлементы.